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蘭伯艾克斯|細胞培養中應注意的問題

更新時間:2023-08-23點擊次數:1198


培養基為什么偏紫色

為了方便觀察和感知培養液的狀況,我們可以在培養基中加入酚紅指示劑。酚紅指示劑對于pH值在6-8范圍內非常敏感,呈現出從黃色到紫紅色的變化。當培養液偏酸時,酚紅會呈現偏黃色;而當培養液偏堿性時,酚紅會呈現偏紫色。


通常情況下,當培養液變成黃色時,這可能是由于細菌或細胞過度增長,產生了酸性物質。而當培養基保存在4℃冰箱中,二氧化碳會逐漸溢出,導致pH偏堿性,從而使培養基呈現偏紫色。對于呈現偏紫色的培養基,我們可以通過通入經無菌過濾的二氧化碳來調整pH值后繼續使用。


然而,長時間未使用完的堿性培養基不建議繼續使用,因為它可能導致細胞生長停滯或死亡。以上是針對培養液顏色變化的一些解釋和建議。根據具體情況,可能需要進一步調整和優化處理方法。


細胞培養的注意問題

1. 在細胞培養液中加入HEPES可以穩定液體的pH值。HEPES的全稱是N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid,它是一種氫離子緩沖劑,可以在較長時間內維持恒定的pH范圍。HEPES對細胞沒有毒性作用,一般的細胞培養液中含有20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。


2. 使用培養基顏色變化作為換液的指標是一個實用但不準確的方法。在培養液中加入了指示劑酚紅,液體的顏色變化可以間接提示細胞生長的狀態。當細胞生長旺盛時,會產生酸性物質,導致液體呈黃色;相反,液體會呈紫紅色。但是,僅憑顏色變化來判斷細胞生長狀態是不夠的,還需要結合其他指標進行細胞觀察和評估。


3. pH值變化大會對細胞產生傷害,不利于細胞生長。


4. 不是所有的細胞培養基都適用相同的CO2濃度。CO2濃度的選擇取決于培養基中NaHCO3的濃度。CO2和溶液中的HCO3-形成緩沖體系,使整個培養體系的pH值維持在弱堿性(約為7)。當培養基暴露在空氣中時,HCO3-會迅速分解,導致pH值快速升高,從紅色變為紫色。當將培養基放入細胞培養箱中,在CO2的作用下,pH值會緩慢地從紫色變回紅色。


不同細胞培養基的NaHCO3濃度不同,使用不同細胞培養基時應選擇相應的CO2濃度。具體選擇的CO2濃度如下:


當NaHCO3濃度<1.5g/L時,所需CO2濃度為4%;當NaHCO3濃度處于1.5-2.2g/L之間時,所需CO2濃度為5%;


當NaHCO3濃度處于2.2-3.4g/L之間時,所需CO2濃度為7%;


當NaHCO3濃度>3.5g/L時,所需CO2濃度為10%。



當我們發現培養液的pH值在細胞不斷生長過程中發生異常變化時,我們應該采取以下措施:



1. 檢查二氧化碳濃度是否適當:根據培養基中的碳酸氫鈉濃度,調整培養箱中二氧化碳的百分比。對于2.0至3.7 g/L的碳酸氫鈉,使用5-10%的二氧化碳濃度。或者考慮使用不依賴二氧化碳的培養基。


2. 檢查培養瓶蓋是否太緊:將瓶蓋松開1/4圈。


3. 確保碳酸氫鹽緩沖充分:加入HEPES緩沖液,使最終濃度達到10-25 mM。


4. 檢查培養基中的鹽是否正確:在CO2條件下使用Earle's鹽培養基,在常氣環境下使用Hanks'鹽培養基。


5. 檢查是否有細菌、酵母或真菌污染:將培養物和培養基丟棄,嘗試去除污染的培養物。以上是處理培養液pH異常變化的一些常見方法,根據具體情況,可能需要進一步調整和優化處理方法。



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